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Dra. Fabiola Castorena Torres

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Efecto de la combinación de Sorafenib, Ácido valproico y Metformina en un xenotransplante fluorescente de hepatocarcinoma

Marco teorico: El hepatocarcinoma ocupa entre los pacientes diagnosticados con cáncer en México, el octavo y sexto lugar en incidencia y mortalidad respectivamente. Los tratamientos actuales para los pacientes con esta enfermedad incluyen el uso del fármaco Sorafenib, un inhibidor de tirosinas cinasas que incrementa la sobrevida en un promedio de dos a tres meses. Con la finalidad de incrementar la sobrevida del tratamiento, se han realizado investigaciones al combinar Sorafenib y otros fármacos utilizados en patologías diferentes al cáncer como el Ácido valproico y la Metformina. Estos fármacos, cuyas propiedades anticancerígenas han sido previamente reportadas, permiten su reposicionamiento hacia el posible uso en tratamiento combinado. Nuestro abordaje es un estudio in vitro e in vivo usando un modelo celular de hepatocarcinoma, que nos permita evidenciar los efectos farmacológicos combinados. Objetivos: General • Evaluar el efecto de la combinación de Sorafenib, Ácido valproico y Metformina sobre la masa tumoral de un xenotransplante fluorescente de hepatocarcinoma en un modelo animal. Específicos • • Determinar el efecto de la combinación farmacológica sobre la muerte celular de la línea celular HepG2. • Cuantificar el nivel de expresión de proteínas relacionadas con la muerte celular por efecto del tratamiento farmacológico combinado. • Determinar el estado de activación de blancos moleculares relevantes en la vía de señalización farmacológica por efecto del tratamiento combinado con sorafenib, ácido valproico y metformina. • Evaluar la eficacia del tratamiento combinado sobre el volumen tumoral de un xenotrasplante fluorescente de hepatocarcinoma. Material y métodos: Se utilizará la línea celular HepG2 como modelo celular de hepatocarcinoma humano. Se evaluará la muerte celular mediante ensayos de exposición de fosfatidilserina por citometría de flujo, fragmentación del DNA por electroforesis en gel de agarosa y ensayos de condensación de la cromatina por tinción nuclear con DAPI. La determinación de la muerte reproductiva se llevará a cabo a través de ensayos clonogénicos. Se realizará la cuantificación de la expresión de proteínas relacionadas con la muerte celular mediante el kit Human Apoptosis Antibody Array y los resultados serán confirmados mediante inmunodetección en fase sólida. Se cuantificará el nivel de expresión de blancos moleculares involucrados en la vía de señalización farmacológica por medio de inmunodetección en fase sólida. Se generará una línea celular estable fluorescente de hepatocarcinoma humano, a través de la transfección de un vector plasmídico recombinante que contenga la proteína GFP y el gen Neo como marcador de selección. Se evaluarán parámetros funcionales como emisión de fluorescencia y respuesta al tratamiento farmacológico in vitro. Se realizará un xenotransplante subcutaneo de la línea celular fluorescente en ratones inmunodeficientes C57BL/6 que serán tratados con el combinado farmacológico durante 21 días. Simultáneo al tratamiento, se cuantificará el volumen tumoral, peso del ratón y mortalidad/supervivencia. Al término del tratamiento, se sacrificará a los ratones y se recuperarán muestras de suero para cuantificación del nivel de expresión de la proteína VEGF. Se tomarán muestras de hígado y páncreas para tinción hematoxilina/eosina y para inmunodetección en fase sólida de los blancos moleculares involucrados en la vía de señalización farmacológica. Las pruebas estadísticas aplicadas serán t de Student para el ensayo de citometría de flujo, el ensayo clonogénico y los ensayos de cuantificación de proteínas. Para las variaciones intergrupales en los parámetros de volumen tumoral y peso del ratón, se aplicará un ANOVA de una vía.

Reprogramación de células mononucleares de sangre periférica de pacientes mexicanos con Diabetes mellitus tipo I a células pluripotenciales inducidas con el uso de fármacos epigenéticos.

El control de la diabetes es uno de los retos más importantes que enfrentan los sistemas de salud en todo el mundo. Para la diabetes mellitus de tipo I, los pacientes requieren de un suministro exógeno de insulina de manera permanente. Aunque se han desarrollado análogos de insulina muy efectivos, incluso dispositivos que pueden dispensar el fármaco de manera regular, estos esfuerzos no han contribuido a la reducción y control de los casos de pacientes complicados. Una de las áreas prometedoras para el tratamiento de la diabetes de tipo I es el trasplante autólogo de células. Dichas células pueden ser obtenidas del mismo paciente, cultivadas, reprogramadas y caracterizadas a un fenotipo de células secretoras de insulina. En los últimos tres años se han publicado una serie de trabajos realizados sobre células madre mesenquimales y células reprogramadas a partir de somáticas, lo que ha evidenciado el éxito relativo sobre la generación de células productoras de insulina. Sin embargo, la baja eficiencia de reprogramación y la reversibilidad de la condición de pluripotencia en los cultivos por una reprogramación incompleta ha dificultado el avance del uso de estas células en la medicina de reemplazo. Este es el entorno donde se enmarca el presente estudio. Objetivos: General Reprogramar células mononucleares de sangre periférica de pacientes mexicanos con Diabetes mellitus tipo I a células pluripotenciales inducidas con el uso de fármacos epigenéticos. Específicos Establecer colonias de células pluripotenciales inducidas a partir de células mononucleares de sangre periférica. Evaluar el efecto de fármacos epigenéticos en la eficiencia de reprogramación de células mononucleares transducidas con factores "Yamanaka". Evaluar los niveles de expresión de marcadores de pluripotencia en células reprogramadas con el uso de fármacos epigenéticos Material y métodos: Las células mononucleares se obtendrán de tres pacientes diagnosticados con diabetes mellitus tipo I, previo consentimiento informado, y que están monitoreados por la Unidad Médica de Alta Especialidad No. 25 en Monterrey, Nuevo León. Se incluirán muestras de tres individuos aparentemente sanos como controles. Las células mononucleares serán aisladas de sangre periférica y serán cultivadas bajo las condiciones descritas previamente. Las células serán transducidas con vectores conteniendo los factores de transcripción OCT3/4 (POU5F1), SOX2, KLF4, MYC y NANOG. Las células serán cultivadas, en presencia de fármacos epigenéticos, en soportes libre de células alimentadoras hasta observar el cambio de la morfología a un estado mesenquimal y se colocarán en soportes con matrices para células pluripotenciales. Se realizarán ensayos de RT-PCR cuantitativa para los marcadores de pluripotencia, así como ensayos de inmunofluorescencia indirecta y citometría de flujo usando anticuerpos específicos contra los antígenos SEEA-1-SEEA-4 y FBXO15, los cuales son característicos de células embrionarias.

  • Doctorado 2004
    Centro de Investigación y de Estudios Avanzados del I.P.N.
    Regulación de la distrofina Dp71 durante la diferenciación muscular
  • Maestría 2000
    Centro de Investigación y de Estudios Avanzados del I.P.N.
    Regulación de la distrofina Dp71 en células musculares y neuronales
  • Licenciatura 1997
    Universidad Autónoma Metropolitana
    Montaje de la prueba de fijación del complemento para el diagnóstico de brucelosis en el laboratorio de inmunología de la UAM-Xochimilco

Ligas de interés